免疫組化染色過程中存在的五大問題以及解決方案!
時間:2023-03-29 15:06
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一、固定不充分
10%中性福爾馬林是目前應(yīng)用最廣泛且效果較好的固定方式。組織塊太大,或固定時間太短,都會導(dǎo)致固定不充分。一般8-24h為宜,具體還需要經(jīng)過實際操作摸索確定。如圖1的這種情況,可適當(dāng)延長固定時間到48h。

圖1 固定不充分
二、內(nèi)源性過氧化物酶
彌散性非特異性背景,可能是由內(nèi)源性過氧化物酶引起的(如圖2)。因此,封閉液要現(xiàn)配現(xiàn)用,充分封閉,一般15min。

三、染料斑點
片子出現(xiàn)染料斑點(如圖3),可能是因為染料放置時間太長,可以嘗試過濾染料;或者洗滌時不充分,殘渣沒有洗掉。

圖3 染料斑點
四、邊緣效應(yīng)
干片的原因有動作太慢、忘記滴液、滴液流失等,造成非特異性染色,即“邊緣效應(yīng)”(如圖4)。采用DAKO筆或PAP Pen在距離組織邊緣3-4 mm處畫圈,可達到有效的避免液體流失、提高操作速度的效果。
另外,向清洗緩沖液中加入吐溫20(Tween-20)也是一種防止干片的好方法。500ml PBS磷酸鹽緩沖液,加入2~3滴Tween-20即可。

圖4 邊緣效應(yīng)
五、染色不均勻
染色不均勻可能是因為臺面傾斜,兩邊液體不均,液體少的一邊,顏色較淺,液體多的一邊,顏色較深;也可能是因為抗原修復(fù)后,熱修復(fù)液未冷卻,立即取出了片子。

圖5 染色不均勻
TMDR-400L型 全自動免疫組化獨立控溫單獨滴染HE染色機
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