1．第一步準(zhǔn)備工作：配制六胺銀染液，將10％硝酸銀2．5ml倒入干凈的染色缸內(nèi)，加入2％硼砂5ml，液體呈乳白色，再加入3％烏洛托品40ml，染液逐漸呈透明狀。

2．第二步染色過程：事先把溫箱調(diào)至60℃?zhèn)溆?，切片?jīng)脫蠟至水，用1％過碘酸氧化10 min，水洗，然后切片放人六胺銀染液放置60℃溫箱1 h，染真菌時(shí)間要相對(duì)短一些，一般情況下肉眼看到染液變色，切片呈棕色時(shí)從溫箱取出染色缸，倒掉染液，自來水沖洗1min，用0．25％氯化金調(diào)色1 min，水洗后，用3％硫代硫酸鈉染5min,水洗，用蘇木精染液淺染，水洗、分化、沖水返藍(lán)，伊紅染10 s，最后經(jīng)脫水、透明、封固。

3．圖示結(jié)果：基底膜與毛細(xì)血管間質(zhì)性物質(zhì)、真菌呈棕黑色，核呈藍(lán)色。

4．注葸事項(xiàng)

(1)掌握染色溫度和時(shí)間，如60℃染1 h，80℃染30～40 min。

(2)真菌類染色時(shí)間相對(duì)要短，染色時(shí)間過長(zhǎng)，切片染色過深，可用分色劑處理。

二、黏液卡紅染色

1．第一步準(zhǔn)備工作：配制黏卡染液，將稱好的胭脂1 g、氫氧化鋁1 g倒入瓶?jī)?nèi)，加入50％L醇100 rnl混合搖勻，再加入氯化鋁0．5g，水浴加溫逐漸煮沸并攪動(dòng)液體，使其充分溶解(注意染液容易外濺)，數(shù)分鐘后，染液由紅色變成透明深紫紅色，冷卻后 將液體倒入量筒，再加入50％乙醇至原量，過濾，放人冰箱備用。

2．第二步染色方法：染液使用時(shí)原液與蒸餾水比例為1：4稀釋.切片厚5 um，脫蠟至水，經(jīng)蘇木精染色2 min、水洗、分化、返藍(lán)后進(jìn)人黏卡液染色2 h以上，染液可以重復(fù)使用多次，但要適當(dāng)延長(zhǎng)染色時(shí)間．切片水洗后，脫水、透明、封固。

3．圖示結(jié)果：黏液為紅色，胞核為藍(lán)色．

4．注意事項(xiàng)

(1)染液使用時(shí)比例為1份黏卡原液，4份蒸餾水。

(2)用酶消化對(duì)照染色特異性很大，消化時(shí)間為20 min。

(3)配制黏卡染液時(shí)要防止液體濺出。

三、石碳酸品紅染色

1．第一步準(zhǔn)備工作

(1)配制鹽基性品紅飽和液：鹽基性品紅溶于乙醇內(nèi)。

(2)配制石碳酸水溶液：將石碳酸結(jié)晶放入熱水浴溶解后取5 ml與事先預(yù)熱的蒸餾水95ml勻備用．(以上二種液體可單獨(dú)保存)。

(3)石碳酸品紅染液：取鹽基性品紅溶液10 ml與5％石碳酸水溶液90 ml混合，使用前過濾。

2．第二步染色方法

切片厚度為6 um，脫蠟至水，石碳酸品紅染色30 min至1 h，(或用微波爐高檔加熱10~20 s)，水洗，用1％鹽酸乙醇分化洗掉切片上多余染液，水洗，0.1％美藍(lán)淺染，背景為淡藍(lán)色、沖水、晾干、封固。

3．圖示結(jié)果：抗酸桿菌呈亮紅色，背景呈淡藍(lán)色。

4．注意事項(xiàng)

(1)用微波染色時(shí)切片容易脫落．

(2)美藍(lán)染色宜淺。

四、奧辛藍(lán)一PAS染色

1．第一步準(zhǔn)備工作

(1)配制奧辛藍(lán)染液；將奧辛藍(lán)1 g溶解于3％的醋酸溶液，調(diào)整液體PH值為2.5。

(2)配制PAS染液：將堿性品紅1 g加人煮沸的蒸餾水內(nèi)溶解，溫度降至50℃時(shí)加入亞硫酰氯1 ml(加亞硫酰氯時(shí)要在通風(fēng)廚內(nèi)進(jìn)行)放入冰箱過夜。加入活性碳2 g，搖動(dòng)混合液1 min，靜止10 min后，過濾于棕色瓶?jī)?nèi)，放置冰箱保存。

2．第二步染色方法

(1)奧辛藍(lán)染色：切片脫蠟至水經(jīng)3％醋酸溶液l10min，切片直接進(jìn)入1％的奧辛藍(lán)染色10 min，水洗，必要時(shí)用1％的中性紅對(duì)比染色，水洗。

(2)PAS染色切片厚5um，脫蠟至水，用0.5％過碘酸氧化10min后流水沖洗1 min，用紙吸干切片周圍水分，用干燥的吸管吸取PAS染液，滴染10~20 min，流水沖洗1 min，用蘇木精淺染1 min，水洗、分化、返藍(lán)、然后進(jìn)行脫水、透明、封固。

3．圖示結(jié)果：PAS陽(yáng)性物質(zhì)呈玫瑰紅色，胞核呈藍(lán)色。

4．注意事項(xiàng)
(1)加亞硫酰氯時(shí)要在通風(fēng)廚內(nèi)進(jìn)行。
(2)過碘酸恢復(fù)室溫才能使用(20℃以內(nèi))。
(3)染色時(shí)要加對(duì)照片。
(4)氧化時(shí)間要限制在10 min內(nèi)。
(5)PAS染液易揮發(fā)使染色反應(yīng)遲緩或紅色太淺，加入數(shù)滴亞硫酰氯即可。
(6)如果染奧辛藍(lán)-PAS時(shí)，省略染蘇木精步驟。